TECHNICAL COLUMN
学习资源该操作以 Invitrogen 公司的脂质体转染试剂 LipofectAMINE 为例,其它转染试剂可参照各自的使用说明书进行。
1.在 6 孔板中接种 1-3×105 细胞/孔,加入 2ml 完全培养基,置CO2 孵箱中 37℃培养过夜。
2. 待细胞长到 50-80%单层时,在无菌离心管中配制如下溶液:
i.
溶液 A:将 1-2ug待转染的超纯 DNA 稀释到 100ul无血清培养基中
ii.
溶液 B:将 2-25ul LipofectAMINE 稀释到 100μul无血清培养基中
3. 混合溶液 A 和 B,轻轻混匀,室温放置 15-45min。
4. 用 2ml 无血清培养基轻轻洗涤细胞,加入 0.8ml 无血清培养基/孔,将脂质体复合物滴加到孔中,轻轻摇晃混匀,置 CO2 孵箱中 37℃孵育 2-24hr。
5. 用完全培养基替换转染液,继续培养。
6. 24-72hr 后检测蛋白质的表达或传代并加入选择性抗生素以筛选稳定表达株。
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